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| 步驟 | 實驗內容 | 實驗時間 | 備注 |
|---|---|---|---|
| 1 | 重組酵母表達質粒構建 | 2 周 | 可選擇不同載體；不同親和標簽；分泌或胞內表達 |
| 2 | 重組質粒電轉化 | 1周 | 不同表達菌株可選， PCR 鑒定5-10個克隆 |
| 3 | 重組表達子篩選 | 3-4周 | 5-10個克隆篩選， Zeocin抗生素濃度篩選重組子，結合Western blot 方法鑒定重組蛋白表達 |
| 4 | 小規模蛋白表達和純化 | 2-4周 | 優化培養基，菌體密度，甲醇濃度，誘導時間等 |
| 5 | 大規模蛋白表達和純化 | 根據表達體積商定 | 可選擇搖瓶或者發酵罐培養 |
您可根據實驗需求選擇上述任一實驗內容，或相關實驗內容的組合
純化時選用親和純化、離子柱純化、疏水填料純化和分子篩純化； 蛋白本身特性，表達系統的選擇會影響最終蛋白的純度和活性。
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