mRNA疫苗

• mRNA疫苗將外源目的基因序列通過轉錄、合成等工藝制備的mRNA通過特定的遞送系統導入機體細胞，直接在體內表達目的蛋白，刺激機體產生特異性免疫學反應，從而使機體獲得免疫保護。mRNA具有以下特點：
  能導入細胞，在體內表達相應的抗原蛋白，避免了體外蛋白表達、純化過程；能夠刺激免疫系統產生體液免疫和/或細胞免疫應答，發揮相應的免疫預防和/或免疫治療作用；能夠通過刺激機體免疫系統產生多種細胞因子等方式增強機體免疫反應能力或改變免疫應答類型；由于mRNA的降解是通過細胞正常代謝完成，降低了因感染或整合誘發基因突變的潛在風險，此類型疫苗具有其獨特的優勢。
  基于mRNA疫苗的作用機制和特點，尊龍凱時生物技術藥物分析部門為支持mRNA疫苗的安全性和有效性評價，建立了涵蓋代謝及生物分布，到總抗體、關鍵序列結構域抗體和抗病毒中和抗體效價，以及細胞免疫應答反應效力的系列評價技術平臺。

• 尊龍凱時擁有ABI7500系列Real-Time PCR擴增儀器以及配套的Kingfisher 核酸提取儀設備，可基于RNAase free管收集的Trizol保存的全血樣品以及其它類型的組織樣品通過后續的RT-qPCR技術進行mRNA的代謝與分布分析。
  △實時PCR檢測mRNA表達水平

• mRNA疫苗需要在體內翻譯成蛋白質后才能刺激機體進一步產生免疫應答，因此在蛋白層面上確認mRNA的表達水平和分布尤為重要。
  尊龍凱時生物藥分析部擁有多臺Molecular Device M4系列酶標儀及新型iD5系列酶標儀，MSD系列電化學發光分析儀等支持多種類型的免疫分析方法，可以執行mRNA所翻譯蛋白抗原水平的不同靈敏度范圍的檢測和監測。
  酶聯免疫分析(EIA)熒光免疫分析(FIA)時間分辨熒光（TRFIA）熒光共振能量轉移（FRET）化學發光（CLIA）電化學發光（ECL）
  △試驗所用酶標儀及電化學發光分析儀

• mRNA疫苗除引起B細胞體液免疫反應產生抗體外，也可刺激引起細胞的免疫反應，尊龍凱時生物技術藥物分析部門擁有MSD、luminex、FACS CBA等多個多重細胞因子分析平臺提供節約樣本、節約成本模式的細胞因子分析技術支持，甚至ELISPOT單細胞層面的細胞因子豐度變化分析。
  MSD Multi PlexLuminex MultiplexFACS CBA
  △細胞因子豐度分析
  △多重細胞因子分析平臺

• 常規的B細胞分泌抗體效價評價主要基于間接ELISA的滴度檢測方法，尊龍凱時技術團隊核心成員早年致力于核酸及蛋白疫苗產品研究，獲得過相關專利，且在美國本土的pfizer公司接受過疫苗效價生物分析評價的系列培訓，基于實踐經驗建立了系列方法評價體系和標準制定規則，用于考察疫苗總抗體、關鍵結構域抗體效價以及評判它們的相關性。尊龍凱時生物技術藥物分析部門也可以基于MSD平臺，利用經驗證試劑盒直接進行基于SARS-CoV-2五種不同的重要mRNA表達抗原SARS-CoV-1 Spike, SARS-CoV-2 N, SARS-CoV-2 S1 NTD, SARS-CoV-2 S1 RBD, and SARS-CoV-2 Spike的IgG、IgM、IGA檢測。
  V-PLEX SARS-CoV-2 Panel 1 (IgG)V-PLEX SARS-CoV-2 Panel 2 (IgM)V-PLEX SARS-CoV-2 Panel 3 (IgA)

• 尊龍凱時疫苗分析技術平臺除了既可以基于電化學發光MSD平臺應用競爭性的配體結合分析方法執行例如新冠mRNA疫苗體內表達抗原所刺激的功能性抗體即中和抗體分析，也有獨立細胞房等設備設施以進行基于假病毒與表達ACE2細胞株相互作用的中和抗體分析。
  △競爭性配體結合法(CLBA)的中和抗體檢測原理
  △Cell-based中和抗體檢測原理

• mRNA疫苗的生產工藝路徑

  mRNA藥物治療的優勢有哪些？

• mRNA腫瘤疫苗的優勢有哪些？

  mRNA腫瘤疫苗具有以下優勢：
  (1) 抗原選擇范圍廣
  (2) 自佐劑效應：表現更強的免疫原性
  (3) 安全性高：不整合到基因組，安全性高于DNA疫苗
  (4) 生物化學合成，生產過程無病毒感染風險
  (5) 不依賴于細胞培養，構建速度快，借助于人工智能、計算生物學、疫苗學等

• mRNA腫瘤疫苗研發的挑戰有哪些？

  mRNA腫瘤疫苗研發的挑戰:

  藥學研究階段：
  ? 腫瘤新抗原的識別和篩選
  ? mRNA核酸序列設計和修飾
  ? 遞送系統優化

  臨床前研究階段：
  ? 動物模型選擇是核心和關鍵

• mRNA疫苗的主要給藥策略有哪些？

  mRNA疫苗的主要給藥策略包括：
  ? 皮下注射
  ? 皮內注射
  ? 結節內注射
  ? 肌肉注射
  ? 靜脈注射
  ? 腫瘤內注射
  ? 鞘內注射
  

• 所有研究均在同一園區內實驗室有序完成，切實保證實驗進度和項目溝通的高效性，占據數據獲取和評估的行業優越性。