臨床前心腦血管疾病藥效評價模型

• 心腦血管疾病泛指由于高脂血癥、血液黏稠、動脈粥樣硬化、高血壓等所導致的心臟、大腦以及全省組織發生的缺血性或出血性疾病。

  我國心腦血管每年治療費用支出5406億元，腦血管疾病每年治療費用占心腦血管疾病25.68%，其中，缺血性腦卒中占比18%，出血性腦卒中占比7%。

  腦中風主要有缺血性中風（短暫性腦缺血發作、動脈粥樣硬化性血栓性腦梗塞、腔隙性腦梗塞、腦栓塞）、出血性中風（腦出血、蛛網膜下腔出血）兩大類。

  疾病名稱	ICD 10代碼	對應模型
  腦出血	I60-I62	顱內自體血注射，蛛網膜下腔出血
  腦梗塞	I63	缺血性腦卒中模型
  腦卒中	I64
  腦血栓	I65
  腦栓塞	I66
  其他	I67-I69	其他

• 動物模型：
  局灶性腦缺血：MCAO/R模型-線栓法、栓塞法、光化學法等全腦缺血：血管夾閉法
• 體外模型：
  氧糖剝奪模型雙氧水等刺激的氧化應激模型其他：Transwell 法考察 BBB 指標、離體腦切片、神經血管單元等

• 缺血性腦卒中和出血性腦卒中是腦血管系統最常用的藥效學評價系統，由于大腦中動脈栓塞模型 MCAO（Middle Cerebral Artery Occlusion）的發病機理與人類缺血性腦卒中表現相似，對于制作模擬人腦缺血模型對腦缺血發病機制及藥 物篩選有重要意義，是美國國立衛生研究院（National Institutes of Health，NIH）和卒中治療學術產業圓桌會議（Stroke Treatment Academic Industry Roundtable，STAIR）重點推薦藥效學評價體系。

• 在試驗中通常使用經典的線栓法建立模型：分離暴露頸部血管，從頸外動脈(external carotid artery，ECA) 或頸總動脈(common carotid artery，CCA) 分叉處插入尼龍線，進入頸內動脈 (internal carotid artery，ICA)，阻斷大腦中動脈（Middle Cerebral Artery，MCA）起始端及其所有側支血液供應，導致 MCA 區局灶缺血。
• 尊龍凱時MCAO模型系統評價體系的優勢
  模型評估是檢驗結果的關鍵步驟。尊龍凱時嚴格遵循STAIR腦卒中臨床前藥物開發策略指導，擁有豐富的MCAO模型建立經驗和成 熟的MCAO模型系統評價體系：
  病灶穩定，高成功率，高存活率的大鼠、小鼠MCAO模型；可靠有效的量效時效關系評價；可完成短暫性腦缺血和永久性腦缺血的藥效評價；可根據STAIR技術指南要求，完成多種藥效學核心指標考察；可根據客戶定制要求，對特殊疾病嚙齒類動物進行造模并完成活性評價。

  研究目的	模型類型 / 試驗方法	動物種屬	考察指標
  量效關系-時效關系	MCAO 模型	小鼠	? 腦梗死體積 ? 腦含水量
  治療時間窗			? 腦梗死體積 ? 腦含水量 ? 腦體積
  行為學表征			? Zea-longa評分 ? 平衡木通過時間 ? 轉棒滯留時間 ? 抓握力
  綜合評價		大鼠	? 腦梗死體積 ? 行為學評分
  抗凝血功效	毛細玻管法	小鼠	凝血時間

• 動物：ICR小鼠，雄性
  組別： 對照組，模型組，陽性藥組（先必新 ）
  考察指標：TTC法考察梗死體積，烘干法考察腦含水量。
  方法：
  ? 線栓法對小鼠右側中動脈進行阻斷，阻斷1h后拔除線栓，實現再灌注。
  ? 量效考察：動物分別在梗死后0.5h靜脈注射給藥陽性藥先必新20，10，1，0.1和0.01mg/kg，考察量效關系。
  ? 時效考察：動物分別在梗死后0.5h以及再灌注后2h，6h，8h和10h靜脈注射給予陽性藥先必新20mg/kg，考察時效關系。
• TCC 染色法
  TCC 染色法是對缺血腦組織進行染色觀察的常見手段，具體操作為迅速將大鼠大腦取出，用冷鹽水沖洗后，快速放于 -20℃ 冰箱中放置 10 分鐘，待腦組織稍硬后，取出切掉嗅球、垂體、低位腦干，由前向后冠切片，均勻切成 2 mm 厚腦片，等 分切成 5 片，置于 1%TTC 溶液中，37℃ 避光孵育 30 分鐘，每隔 5 分鐘左右翻動一次。TTC 可與正常組織內的脫氫酶系統反應被還原為玫瑰紅色，因此使組正常組織染呈玫瑰紅色，梗死組織呈白色。
  量效關系考察（TTC和腦含水量）（ mean±SEM）
  時效關系考察（TTC和腦含水量）（ mean±SEM）

• 動物：ICR小鼠，雄性
  組別：對照組，模型組，陽性藥組（先必新 ）
  考察指標：TTC法考察梗死體積，排水法考察腦體積，烘干法考察腦含水量。
  方法：
  ? 線栓法對小鼠右側中動脈進行阻斷，阻斷1h，2h和4h后拔除線栓，實現再灌注。
  ? 治療時間窗考察：動物分別在梗死后0.5h靜脈注射給藥陽性藥先必新20mg/kg，考察治療時間窗。
  結果
  治療時間窗考察 A：TTC；B：腦體積，C：腦含水量 （mean±SEM）

• 動物：ICR小鼠，雄性
  組別：對照組，模型組，陽性藥組（先必新 ）
  考察指標：Zea-longa評分，平衡木通過時間，轉棒滯留時間，抓握力
  方法：
  ? 線栓法對小鼠右側中動脈進行阻斷，阻斷1h后拔除線栓，實現再灌注。
  ? 神經功能恢復考察：動物分別在梗死后0.5h靜脈注射給藥
  ? 陽性藥先必新20mg/kg，考察治療時間窗。
• MCAO小鼠模型評價系統—神經功能考察
  神經功能藥效學考察： A: Zea-longa評分；B: 平衡木通過時間
  神經功能藥效學考察： C: 轉棒滯留時間；D: 抓握力（mean±SEM）

• 動物：SD大鼠，雄性
  組別：對照組，模型組，陽性藥1組（依達拉奉 ），陽性藥2組（尼莫地平）
  考察指標：Zea-longa評分， TTC法考察梗死體積
  方法：
  ? 線栓法對大鼠右側中動脈進行阻斷，阻斷2h后拔除線栓，實現再灌注。
  ? 藥效學考察：動物分別在梗死后0.5h靜脈注射給藥陽性藥，考察兩陽性藥藥效學作用。
• 大鼠行為學考察 （Zea-longa評分和動物行為）
  無神經功能缺陷：0 分；癱瘓側前爪不能完全伸展：1 分；行走時向癱瘓側轉圈：2 分；行走時向癱瘓側傾倒：3 分；不能自動行走，存在意識喪失現象：4 分。  

• 結果-1：大鼠的行為學評分

• Result-2：TTC staining of brain
  腦梗死體積考察（ TTC染色和梗死體積比）

• 嚙齒類動物腦卒中疾病藥效成藥性評價系統

  缺血性腦卒中體內的腦缺血模型研究模型

• 腦卒中的定義

  “腦卒中” (cerebral stroke)又稱“中風”、“腦血管意外” 。腦卒中是一種急性腦血管疾病,是由于腦部血管突然破裂或因血管阻塞導致血液不能流入大腦而引起腦組織損傷的一組疾病。

• 所有研究均在同一園區內實驗室有序完成，切實保證實驗進度和項目溝通的高效性，占據數據獲取和評估的行業優越性。