尊龍凱時核酸藥物研發(fā)平臺是集成了藥物發(fā)現(xiàn)、生產(chǎn)和臨床前研究的一體化綜合性平臺。基于嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度、開放的技術(shù)平臺和先進(jìn)的儀器設(shè)備，我們可以滿足行業(yè)對于前沿創(chuàng)新核酸藥物的研發(fā)需求，承接醫(yī)藥公司及科研單位的核酸藥物發(fā)現(xiàn)、篩選及臨床前研究服務(wù)。

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熱門核酸藥物種類

ASOsiRNA mRNA Aptamer

核酸藥物的優(yōu)勢
核酸藥物基于堿基序列快速直觀的設(shè)計，利用簡單的制備原料和工藝，可負(fù)擔(dān)的生產(chǎn)成本，讓藥物研發(fā)的周期大幅縮短，讓藥物定制或個性化治療方案成為可能，使罕見病等困擾目前醫(yī)藥行業(yè)的棘手問題得以解決。
核酸藥物合成&修飾
合成
◆ 核苷酸單體合成
◆ 寡核苷酸合成
◆ 遞送系統(tǒng)合成
◆ 寡核苷酸偶聯(lián)物合成
修飾
◆ 糖修飾
◆ 堿基修飾
◆ 骨架修飾
◆ 遞送系統(tǒng)修飾
尊龍凱時核苷酸藥物化學(xué)合成平臺可以一站式提供單體合成、修飾；寡核苷酸合成；遞送系統(tǒng)合成以及寡核苷酸偶聯(lián)物的合成。已經(jīng)建成的siRNA庫，不僅有豐富的單體庫存，而且擁有龐大的單體合成砌塊庫，可以快速完成各類修飾單體的合成。尊龍凱時擁有專業(yè)的小核酸藥物的研發(fā)團隊可以提供高效快捷地研發(fā)服務(wù)；已有多個siRNA藥物FTE項目完成和進(jìn)行中。
生物活性評價
◆ siRNA-GALNAc與靶向肝細(xì)胞的結(jié)合評估（ELISA,SPR,FP,FACS,MSD,Confocal 顯微鏡）
◆ 靶標(biāo)mRNA/蛋白質(zhì)水平降低評估（RT/Q-PCR,Western blot)
◆ 細(xì)胞表型和功能性干擾的評估（細(xì)胞增殖，遷移，蛋白質(zhì)修飾和互作）
◆ 脫靶效應(yīng)評估
◆ 在數(shù)據(jù)庫尋找潛在的脫靶off-target mRNA和蛋白（數(shù)據(jù)庫如NCBI/nucleotide BLAST)
◆總體分析脫靶現(xiàn)象(RNAseq or RNA Microarray)
核酸藥物CMC研究
寡核苷酸藥物開發(fā)過程中藥學(xué)方面的挑戰(zhàn)主要是寡核苷酸大規(guī)模生產(chǎn)能力和分析與質(zhì)控能力要求高，大規(guī)模生產(chǎn)對單體原料，設(shè)備，合成工藝及純化方面都有很高要求。制劑方面的挑戰(zhàn)在于制備LNP（GalNac技術(shù)的小核酸除外）的難度高；分析方面挑戰(zhàn)在于寡核苷酸的有關(guān)物質(zhì)與活性成分本身的結(jié)構(gòu)相似性大，質(zhì)量研究與控制需要多原理不同手段的分析方法進(jìn)行，除了一般注射劑研究外還要進(jìn)行LNP的包封率測定等。尊龍凱時在siRNA等寡核苷酸藥物方面的CMC服務(wù)項目已啟動。
核酸藥物工藝開發(fā)
起始物料選擇：易采購、低毒性、質(zhì)量穩(wěn)定的原輔料和試劑選擇；核酸工藝開發(fā)：低成本、高安全性、質(zhì)量穩(wěn)定的綠色生產(chǎn)工藝；質(zhì)量控制：先進(jìn)的質(zhì)量控制體系，完善的質(zhì)控技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)；工藝放大：端到端深度對接，平穩(wěn)轉(zhuǎn)移。

核酸藥物制劑服務(wù)

脂質(zhì)及其衍生物憑借其低免疫原性、生物相容性及對寡核苷酸分子較高的包封率成為近年來備受關(guān)注的核酸藥物的新型遞送系統(tǒng)，系統(tǒng)中的脂質(zhì)可以在生理環(huán)境下帶有正電荷，通過靜電作用將帶有負(fù)電荷的核酸分子包裹起來，并幫助整個載體系統(tǒng)與靶細(xì)胞的細(xì)胞膜相結(jié)合，從而起到遞送作用。
圖片來源：Science China Life Sciences volume 62,pages333-348(2019)
常見脂質(zhì)遞送系統(tǒng)
尊龍凱時常用納米粒子制備方法
成功RNA遞送系統(tǒng)的特征
遞送系統(tǒng)的設(shè)計依靠化學(xué)修飾手段可以實現(xiàn)，合成途徑不復(fù)雜，便于生產(chǎn)；有靶向的遞送，遞送的靶向和脫靶比率要在可接受的范圍。靶向和脫靶遞送需要同時使用生物分布和功能化指標(biāo)來衡量，因為95%的RNA可能被保留在內(nèi)體(endosome)中，生物分布并不見得能夠預(yù)測RNA的功能性遞送。產(chǎn)生療效的RNA劑量必須顯著低于可能產(chǎn)生毒性的劑量；藥物的活性應(yīng)該在不同批次之間保持一致;在大多數(shù)臨床環(huán)境下，重復(fù)給藥不會導(dǎo)致療效或安全性的喪失。

尊龍凱時納米遞送系統(tǒng)研究體系

核酸-脂質(zhì)系統(tǒng)研究

? 處方：藥脂比研究、溶劑篩選、水相：有機溶劑比例研究等；

? 工藝：制備方法；

? 穩(wěn)定性：溶液狀態(tài)初步穩(wěn)定性；

? 劑型篩選。

核酸藥物生物分析

藥代、毒代分析

? 分子雜交-酶聯(lián)分析（H-ELISA) LC-MS/MS ；

? 分子雜交-電化學(xué)發(fā)光分析（H-ECL）；

? 反轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR（RT-qPCR）；

? 定量PCR(qPCR)；

? 數(shù)字微滴PCR(ddPCR)。

免疫原性分析

? 總抗藥物抗體即ADA分析；

? MSD ；

? 中和抗體（Nab)分析：CLBA or Cell-based Assay。

PD或TOX相關(guān)細(xì)胞因子和生物標(biāo)志物

Cytokine&Biomarker(細(xì)胞因子或生物標(biāo)志物）

? Singleplex（基于各種LBA技術(shù)）；

? Multiplex(Luminex、MSD、FACS CBA技術(shù)）；

? FACS。

尊龍凱時案例：Compound A –siRNA plasma quantification (20 μL plasma)

生物分析三大技術(shù)平臺

LC-MS/MS/HRMS技術(shù)平臺
高特異性靈敏度：可達(dá)ng級別優(yōu)勢：可監(jiān)測代謝產(chǎn)物
Hybridization-EIA/ECL技術(shù)平臺
靈敏度：可達(dá)pM級優(yōu)勢：多變的標(biāo)記策略、個性化的反應(yīng)策略
qPCR/ddPCR技術(shù)平臺
高特異性靈敏度：可達(dá)1個log級別內(nèi)的拷貝數(shù)優(yōu)勢：更靈敏

核酸藥物藥效學(xué)評價

寡核苷酸藥物開發(fā)過程中藥效學(xué)方面的挑戰(zhàn)包括：靶向不足導(dǎo)致靶部位的寡核苷酸藥物濃度低導(dǎo)致給藥劑量不斷增高；寡核苷酸藥物與非靶 RNA 結(jié)合引發(fā)的脫靶毒性等。

尊龍凱時案例：核酸藥物藥效學(xué)評價

◆ 不同用藥途徑的比較（如靜脈注射，瘤內(nèi)局部注射）

◆ 體內(nèi)藥效與靶標(biāo)mRNA/蛋白質(zhì)降解（PD）和寡核苷酸藥物的系統(tǒng)暴露量（PK）的相關(guān)性分析

? Animals: Female BALB/c Nude mice；

? Cells: MDA-MB-231, 5x10⁶/mouse；

? Model Establishment: Right flank SC injection；

? Treatment: IV injection;

TIW (three times a week);

Group3, 4: mRNA (LNP)group.

? Animals: Female BALB/c Nude mice；

? Cells: MDA-MB-231, 5x10⁶/mouse；

? Model Establishment: Right flank SC injection；

? Treatment: Intratumor in-jection;

TIW (three times aweek);

Group 7, 8: mRNA(LNP) group.

◆ 脂質(zhì)納米粒（Dendrimer LNP）

◆ (遞送和NIR影像，Luc mRNA;Ⅳ and intra-tumoral)

◆ 外泌體（CNP-generated exosome)

◆ （腦膠質(zhì)瘤導(dǎo)向外泌體Exo-T遞送PTEN mRNA,IV）

同源小鼠模型

Cancer Type	Cell Lines
Bladder Cancer	MB49
Brain Cancer	G261
Breast Cancer	4T1, EMT6, JC,EO771
Colon Cancer	CT26.WT, MC-38, Colon26
Leukemia	C1498, L1210, WEHI-3
Liver cancer	H22, Hepa 1-6
Lung Cancer	LLC1, KLN205
Lymphoma	A20, EL4, L5178-R, E.G7-OVA
Mastocytoma	P815
Melanoma	B16-F10, Clone-M3
Myeloma	J558
Pancreas Cancer	Panc 02
Renal Cancer	RENCA

Luciferase Cell Line

G261-luc, 4T1-luc, Mc38-luc, H22-luc, B16-F10-luc, LLC1-luc

人源化小鼠模型

Cancer Type	Cell Lines in PBMC or HSC CD34+ Humanized Mice
Brain Cancer	U-87 MG
Breast Cancer	HCC1954, MDA-MB-231, JIMT-1
Colon Cancer	HT29, LoVo, Ls174T, HT-15
Gastric Cancer	NCI-N87, NUGC-4
Leukemia	THP-1
Lung Cancer	HCC827, NCI-H1975, NCI-H292, A549
Lymphoma	Raji, TMD8, MOLM-13
Melanoma	A375
Myeloma	RPMI-8226, NCI-H929, MM.1S
Ovarian Cancer	OVCAR-3
Pancreatic Cancer	Capan-2
Renal Cancer	786-O
Skin Cancer	A431

核酸藥物藥代動力學(xué)研究

寡核苷酸藥物開發(fā)過程中藥代動力學(xué)PK方面的挑戰(zhàn)也是此類藥物較大的難題。未經(jīng)修飾的寡核苷酸類藥物成藥性不佳；PK特性差；穩(wěn)定性差；容易被核酸酶降解；分布特性差；和靶標(biāo)的結(jié)合力不佳；生物分析方法開發(fā)難度大等。
通過化學(xué)修飾和遞送系統(tǒng)可以解決這些問題。隨著技術(shù)突破，部分難題目前得到較好的解決辦法，其中化學(xué)修飾可以避免核酸類藥物被核酸酶降解并延長半衰期，高效安全的遞送系統(tǒng)可以使寡核苷酸類藥物精準(zhǔn)的靶向器官，比如肝臟，并提高細(xì)胞攝取效率，使寡核苷酸類藥物發(fā)揮較好的治療功能。寡核苷酸藥物從轉(zhuǎn)錄后水平進(jìn)行治療，能針對難以成藥的特殊蛋白靶點實現(xiàn)突破，有望攻克尚無藥物治療的疾病包括遺傳性疾病和其他難治性疾病。
尊龍凱時具備完善的寡核苷酸生物分析平臺、肝臟活體穿刺、肌肉活檢和鞘內(nèi)注射平臺用于PK和PK/PD研究。
尊龍凱時食蟹猴B超引導(dǎo)下肝臟活體穿刺平臺能夠最大程度地避開大血管及膽囊，具有創(chuàng)傷小、穿刺操作安全簡便、定位準(zhǔn)確、術(shù)后恢復(fù)較好等優(yōu)勢。
B超引導(dǎo)下肝臟活體穿刺平臺可實時動態(tài)顯示活檢針進(jìn)針取材的全過程，提高穿刺成功率和實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，同時也促進(jìn)了實驗動物福利的完善，已經(jīng)多次應(yīng)用于基因治療藥物的臨床前體內(nèi)PK和PK/PD評價項目，并在同一個體動物上不同時間點實現(xiàn)連續(xù)采集多份肝臟樣品。
同時，食蟹猴肌肉活檢平臺同樣可實現(xiàn)在同一個體動物上連續(xù)采集多份肌肉樣品；對于神經(jīng)系統(tǒng)治療藥物，局部鞘內(nèi)注射平臺實現(xiàn)局部治療，都能夠為基因療法和核酸藥物臨床前PK和PK/PD評價提供有力支持。
2022年7月8日線上研討會《助力揚帆，核酸藥物新時代啟航》是你核酸藥物研發(fā)前行路上不可錯過的可靠向?qū)А＿@是一場干貨滿滿的知識盛宴，是一場關(guān)乎核酸藥物未來的頭腦風(fēng)暴，更是一場值得每一位醫(yī)藥人士參與的驚喜約“會”，快來觀看視頻回放吧。
視頻回放：【核酸藥物研發(fā)專題研討會】破局核酸藥物研發(fā)，迎接核酸藥物新時代
2023年1月5日，尊龍凱時藥代動力學(xué)及生物分析部主任蔣品博士做客尊龍凱時云講堂直播間，根據(jù)尊龍凱時 DMPK 部門的試驗經(jīng)驗，分享一些不同類型創(chuàng)新藥的DMPK研究案例，講解這些藥物在研發(fā)過程中的DMPK要點，希望對關(guān)注DMPK的各位研究者有所幫助。歡迎觀看視頻回放。
視頻回放：【云講堂】PROTAC和寡核苷酸類藥物研發(fā)的DMPK要點

FAQs

核酸藥物為什么值得研發(fā)？

若想成為新興藥物都應(yīng)滿足以下幾個特點，核酸藥物也不例外：
（1）、有市場；
也就是說要有用藥的需求，目前有7,000多種罕見病，其中約80%是單基因異常，半數(shù)病例為兒童，95%尚無治療手段。而核酸藥物由于其獨特的物理化學(xué)和藥理學(xué)特點在治療罕見病上優(yōu)勢明顯。
（2）、有特色；
最好有不可替代性的作用。當(dāng)前核酸藥物治療分三個主要方向：導(dǎo)入正常基因以補充基因突變失去的功能，通過RNA干擾抑制或沉沒異常基因，通過基因編輯直接糾正異常基因結(jié)構(gòu)，這些都是核酸藥物的獨特治療方式。
（3）、有成功案例；
能提高藥物研發(fā)的效率和成功率，已有多款核酸藥物獲批上市，還有更多核酸藥物正在臨床試驗中。
（4）、有一定技術(shù)難度；
有助于推動創(chuàng)新技術(shù)的發(fā)展和藥物的更新?lián)Q代，保證藥物生命的長久性。核酸藥物的遞送系統(tǒng)、目標(biāo)核酸選擇和制備等，都涉及先進(jìn)的生產(chǎn)或?qū)嶒灱夹g(shù)。
核酸藥物的分類有哪些？

如果按照結(jié)構(gòu)來劃分就分為DNA藥物和RNA藥物，再繼續(xù)細(xì)分就有反義寡核苷酸和小干擾RNA，小RNA、短發(fā)卡RNA、信使RNA、質(zhì)粒DNA、適配體、核酶及脫氧核酶等。
質(zhì)粒DNA目前用的最多的還是獸用疫苗，人用產(chǎn)品還僅僅停留在臨床試驗階段。
小核酸藥物siRNA和ASO的區(qū)別主要有哪些？

1、化學(xué)結(jié)構(gòu)的區(qū)別
ASO是單鏈，siRNA是雙鏈。
2、作用機制的區(qū)別
ASO或通過RNase H降解靶mRNA，或通過空間位阻干擾mRNA功能，siRNA主要通過RISC降解mRNA。
3、發(fā)揮藥效的細(xì)胞空間
Rnase H在胞質(zhì)和胞核都有，ASO可以在胞質(zhì)和胞核發(fā)揮作用，但RISC只在胞質(zhì)，故siRNA只在胞質(zhì)發(fā)揮作用。
4、藥效作用持久性及是否可以放大
RISC可反復(fù)作用靶標(biāo)mRNA，藥效會持久。
另外siRNA被釋放的正義鏈或被降解，也可作為引物，在RNA依賴的RNA聚合酶的催化下以靶mRNA為模板擴增得到dsRNA，dsRNA又被Dicer降解成siRNA，進(jìn)入RNAi循環(huán)，從而藥物效果級聯(lián)放大。
核酸藥物的優(yōu)缺點？

優(yōu)勢: 研發(fā)周期短,靶點篩選快;治療領(lǐng)域廣;不易產(chǎn)生耐藥性;效果持久;研發(fā)成功率高
劣勢: 藥物本身無靶向性;在人體內(nèi)不穩(wěn)定,易被清除
siRNA藥物非臨床安全性特點

? 會呈現(xiàn)靶mRNA被沉默后的生物學(xué)效應(yīng),由此引發(fā)的其它效應(yīng)的可能性在,但一般不易看到
? 由于siRNA核酸序列設(shè)計的專屬性,和非靶mRNA結(jié)合的效應(yīng)很少見
? 由于RISC作用的高效性,較少見到siRNA搶奪其它miRNA資源的情況
? 很多毒性反應(yīng)與siRNA藥物在給藥部位、組織、細(xì)胞殘留或畜積相關(guān),【給藥部位炎性反應(yīng),肝細(xì)胞空泡變,腎小管空泡變及嗜堿性顆粒沉積等】
? 還有一些毒性反應(yīng)是與siRNA藥物排泄過程相關(guān)
? siRNA有誘發(fā)先天性和獲得性免疫反應(yīng)的潛能,但在常規(guī)非臨床安全性研究中常常效應(yīng)不明顯,
? 會出現(xiàn)免疫原性,但抗原不一定就是siRNA本身,制劑輔料或結(jié)構(gòu)組份也會引起,比如若有PEG則易產(chǎn)生抗PEG抗體