MetID技術(shù)

• 代謝產(chǎn)物鑒定（Metabolite Identification, MetID）在新藥研發(fā)中至關(guān)重要：
  在先導(dǎo)化合物優(yōu)化(Lead Optimization)階段，代謝產(chǎn)物鑒定（MetID）可以幫助定位代謝軟點（Soft Spots），以便藥物化學(xué)家進行針對性結(jié)構(gòu)修飾改造，從而改進藥代動力學(xué)性質(zhì)。根據(jù)NMPA與FDA指導(dǎo)原則，體外代謝產(chǎn)物鑒定（MetID）與代謝產(chǎn)物比較是IND申報（IND-Enabling）階段實驗動物種屬選擇的重要依據(jù)。此外，反應(yīng)性代謝產(chǎn)物 （Reactive Metabolite）可與體內(nèi)生物大分子發(fā)生共價結(jié)合，導(dǎo)致毒性反應(yīng)。因此，盡早以谷胱甘肽捕獲（GSH Trapping）等方式進行反應(yīng)性代謝產(chǎn)物篩查，有助于降低后期開發(fā)風(fēng)險，提高藥物安全性。
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  尊龍凱時藥物化學(xué)服務(wù)

  藥代動力學(xué)體外研究

  藥代動力學(xué)體內(nèi)研究

  IND申報

• 體外孵育代謝物鑒定：肝微粒體、肝細胞、S9、肝細胞液、血漿等。 反應(yīng)性代謝物鑒定：GSH trapping。體內(nèi)代謝物鑒定： GSH trapping。 血漿、尿液、膽汁、糞便、組織臟器等。

• 高分辨質(zhì)譜儀（HRMS）是代謝產(chǎn)物鑒定研究的必備利器。尊龍凱時藥代動力學(xué)與生物分析部引進的Thermo Scientific四極桿-超高場靜電場軌道阱（Quadrupole-Ultra High-Field-Orbitrap）質(zhì)譜儀Q Exactive HF-X BioPharma是目前先進的HRMS之一。該儀器具有如下特點：分辨率高達240,000 FWHM 質(zhì)量精度高（<1ppm，可準確擬合分子式）高靈敏度（配備新型高容量離子傳輸管與電動離子漏斗，可檢測納克級別樣品）高掃描速度（Up to 40 Hz）高穩(wěn)定性（無需頻繁校正質(zhì)量軸）等特點。優(yōu)于業(yè)界裝備較多的IT-TOF、TripleTOF、QTof、LTQ-Orbitrap、QE Focus、QE Plus等機型。
  在液相色譜方面，搭配有Thermo Vanquish Flex UHPLC與DAD檢測器，并利用Compound Discoverer軟件進行數(shù)據(jù)分析。此外，UHPLC-UV-QE HF-X系統(tǒng)也廣泛應(yīng)用于相關(guān)分析。

• 在開展MetID試驗時，需要注意些什么？
  第一，在肝微粒體、肝細胞體外代謝模型中，孵育時間需設(shè)置合理，這個合理是基于人體肝微粒體或者肝細胞穩(wěn)定性的結(jié)果而設(shè)定的。如果體系孵育時間過長或過短，則可能引起代謝產(chǎn)物種類和量偏少或偏多，這對最終判定一個代謝產(chǎn)物的比例或結(jié)果起絕對性的一個作用。

  第二，在體外和體內(nèi)代謝產(chǎn)物鑒定試驗中，如有紫外檢測器和質(zhì)譜檢測器數(shù)據(jù)，通常需要把兩者結(jié)合在一起分析，大部分情況下兩者的信號能夠匹配。但是紫外檢測器和質(zhì)譜檢測器的特點不同，質(zhì)譜檢測器相對而言靈敏度更高。而對一些含量相對比較低的代謝產(chǎn)物，紫外檢測器可能檢測不到。

  第三，在代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)、母核類似的情況下，代謝產(chǎn)物間的紫外強度數(shù)據(jù)可能比質(zhì)譜檢測數(shù)據(jù)更可靠。
• MetID在創(chuàng)新化學(xué)藥物相關(guān)動物種屬選擇上的作用
  對于創(chuàng)新化學(xué)藥相關(guān)動物種屬選擇是基于目前現(xiàn)代色譜與與質(zhì)譜的分析方法，通過體外代謝模型來比較動物種屬與人代謝的相似性來確定相關(guān)種屬，包括：分析代謝反應(yīng)類型、代謝產(chǎn)物種類以及量的差異。

  體外的代謝體系常見的有：

  ● 肝微粒體代謝試驗

  ● 肝細胞試驗

  ● s9的實驗

  在肝微粒體中通常可以見到Ⅰ相代謝產(chǎn)物。

  通過體外代謝產(chǎn)物鑒定結(jié)果同時結(jié)合早期動物不同種屬體內(nèi)代謝產(chǎn)物鑒定結(jié)果來為綜合確定IND藥代安評最終種屬提供重要依據(jù)。

  另外如果我們通過體外的代謝產(chǎn)物鑒定結(jié)果，進入了正式的藥代安評體內(nèi)階段的話，我們可以采集藥代或毒代里面的一些樣品比如說血漿或者說排泄物去分析更復(fù)雜體內(nèi)環(huán)境代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生的情況。
• 創(chuàng)新化藥相關(guān)種屬選擇的黃金思維導(dǎo)圖
  通常是先開展體外的代謝產(chǎn)物鑒定。比如說通過肝微粒體體外代謝產(chǎn)物（Ⅰ相代謝產(chǎn)物）的鑒定結(jié)果和肝細胞中既含Ⅰ相又含Ⅱ相代謝產(chǎn)物的一個結(jié)果跟人的體外代謝產(chǎn)物去比較，如果非人種屬體外肝細胞或者肝微粒體的結(jié)果和人能夠較好匹配一致，那么我們從體外角度可以得到較為相關(guān)的嚙齒類和非嚙齒類相關(guān)種屬；如果這兩個體外系統(tǒng)得出的結(jié)果一致性差異較大，比如說肝微粒體傾向于猴，肝細胞傾向于犬，建議從體內(nèi)角度同時增加體內(nèi)代謝產(chǎn)物的鑒定結(jié)果來綜合判斷。

  雖然常規(guī)的流程可能是先開展體外的一個代謝產(chǎn)物鑒定結(jié)果，但是基于目前實驗條件以及可行性方面的考慮同時去開展體內(nèi)的各個種屬的代謝產(chǎn)物鑒定其實不是難事，那么我們可以得到更為可靠的數(shù)據(jù)，繼續(xù)往前推進。

  有時在體外代產(chǎn)物問題結(jié)果不太確定的情況下強烈建議大家再往前進一步去拿到體內(nèi)的一個體內(nèi)的代謝產(chǎn)物鑒定結(jié)果去比較。

  如果體內(nèi)的代謝產(chǎn)物鑒定結(jié)果與體外的人的一個代謝產(chǎn)物鑒定結(jié)果能夠匹配的話，我們可以就確定較為相關(guān)的嚙齒類和非嚙齒類相關(guān)種屬。

  如果體內(nèi)代謝產(chǎn)物鑒定結(jié)果與體外人的一個代謝產(chǎn)物鑒定結(jié)果不是特別匹配，那么在這種情況下我們通常選擇與人最近的嚙齒類和非嚙齒類種屬。

  在綜合分析數(shù)據(jù)的情況下，在臨床前階段，通常只有肝微粒體或者肝細胞的MetID數(shù)據(jù)，在僅有的數(shù)據(jù)前提下同時結(jié)合動物體內(nèi)的MetID去匹配體外人的MetID結(jié)果，為毒理種屬選擇提供重要的依據(jù)。
• 在PK/TK研究中，什么情況下需要做代謝產(chǎn)物監(jiān)測以及代謝產(chǎn)物安全性試驗（MIST）？
  對于這個問題并不是只要產(chǎn)生代謝產(chǎn)物就一定要對其進行監(jiān)測，還存在一個量方面的考慮,所以 FDA MIST 和ICH M3(R2)里有指導(dǎo)只有在人體代謝產(chǎn)物的暴露量超過藥物相關(guān)總暴露量的10%，且在人體中暴露量水平明顯高于毒理學(xué)試驗中動物最大暴露量時，才需要對該代謝產(chǎn)物進行非臨床評價以支持Ⅲ期臨床試驗。

  但通常我們的實際情況是非臨床階段沒有臨床人體代謝產(chǎn)物相關(guān)的數(shù)據(jù)，最終這就是一個對比。

  動物體內(nèi)代代謝產(chǎn)物暴露量與人體代謝產(chǎn)物暴露量的情況，按照排列組合通常會有以下 4 種情況出現(xiàn)：

  （1）、代謝產(chǎn)物里邊在人體是特有的，動物里面沒有

  （2）、人體有但含量比較低，在動物體內(nèi)含量相對比較高

  （3）、動物里特有，人體里沒有

  （4）、人體里代謝產(chǎn)物含量相對比較高，動物體內(nèi)相對比較低。

• 所有研究均在同一園區(qū)內(nèi)實驗室有序完成，切實保證實驗進度和項目溝通的高效性，占據(jù)數(shù)據(jù)獲取和評估的行業(yè)優(yōu)越性。