隨著雙抗技術(shù)的發(fā)展，雙抗如今呈現(xiàn)出良好的發(fā)展前景，各大公司在布局雙抗產(chǎn)品研發(fā)的同時(shí)，也需關(guān)注在雙抗的檢測(cè)和分析中有許多需要針對(duì)這種技術(shù)而加以注意和考量的要點(diǎn)。尊龍凱時(shí)
生物技術(shù)藥物分析部主任章登吉博士在云講堂中為我們帶來了三位一體的雙抗生物分析講座，請(qǐng)點(diǎn)擊文末的“
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尊龍凱時(shí)生物技術(shù)藥物分析部靈活運(yùn)用ELISA, ECL, TRFIA, CLIA, IF, IP, CoIP, qPCR, FACS, ELISpot, 酶學(xué)等多種方法，支持前沿生物藥如蛋白、抗體（單抗、雙或多特異性抗體、抗體片段）、ADC、多肽、核酸、疫苗及細(xì)胞基因治療等藥物在早期開發(fā)、臨床前和臨床階段的PK/TK/Immunogenicity(Total ADA& Nab)/Biomarker&Cytokine等研究評(píng)價(jià)。目前已經(jīng)支持了多個(gè)涉及Her2, Trop2, Muc1等靶點(diǎn)的ADC藥物，和EGFR,PCSK9, IL-17A, IL-6, IL-23, VEGF, CD47, TNF-α, CD20，TIGIT等熱門靶點(diǎn)及4-1BB, PD1, PDL-1, CTLA4等免疫檢查點(diǎn)的單抗或多抗藥物，針對(duì)CD19類的CAR-T，還有各類融合蛋白、核酸以及眾多涉及糖尿病、心血管、骨、腫瘤等相關(guān)疾病的多肽類藥物不同階段的研究工作。
理論：1+1＞2的雙特異性抗體
單克隆抗體主要通過結(jié)合單一的特異表位，起到一定的生物學(xué)作用，比如阻斷蛋白相關(guān)作用、激活或調(diào)節(jié)受體功能。抗體的Fc片段還能起到誘導(dǎo)抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用或補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用。但是也限制了其在一些領(lǐng)域的應(yīng)用，例如需要阻斷多種信號(hào)通路的腫瘤、自身免疫疾病的治療，以及由于病毒高突變率需要結(jié)合多抗原位點(diǎn)阻止病毒逃逸的感染類疾病的治療。因此，雙特異性抗體也就應(yīng)運(yùn)而生。
雙特異性抗體（BsAb）是指能同時(shí)特異性結(jié)合兩種抗原或兩個(gè)表位的抗體分子，可以發(fā)揮兩種單抗聯(lián)合的協(xié)同作用。雙特異性抗體在自然狀態(tài)下并不存在，需要通過重組DNA或細(xì)胞融合技術(shù)人工制備實(shí)現(xiàn)。
雙特異性抗體相比單抗的優(yōu)勢(shì)主要在于可介導(dǎo)時(shí)序或空間效應(yīng)，具體來說就是，雙靶點(diǎn)雙抗或單靶點(diǎn)雙表位雙抗的有效性可能優(yōu)于兩個(gè)單靶點(diǎn)單抗的聯(lián)合使用；雙靶點(diǎn)融合的一個(gè)抗體藥物分子的副作用可能小于單靶點(diǎn)的抗體藥；雙靶點(diǎn)融合的一個(gè)抗體藥物分子可能解決聯(lián)合用藥不能解決的起效機(jī)制問題。但同時(shí)，技術(shù)門檻和研發(fā)成本較高，構(gòu)建階段可能會(huì)遇到表達(dá)量低、穩(wěn)定性差的問題，開發(fā)評(píng)價(jià)階段可能會(huì)遇到模型建立的問題，因此整個(gè)開發(fā)過程需要綜合考慮靶點(diǎn)生物學(xué)、結(jié)構(gòu)生物學(xué)、抗體工程、篩選策略等。
全球領(lǐng)先的雙抗藥物研發(fā)企業(yè)主要有Amgen、羅氏、MacroGenics、Xencor、Genmab、阿斯利康，國(guó)內(nèi)的企業(yè)則主要有康寧杰瑞、百濟(jì)神州、岸邁生物、信達(dá)生物等，他們?cè)陧?xiàng)目數(shù)量和開發(fā)進(jìn)度上處于第一梯隊(duì)。
雙特異性抗體的主要作用機(jī)制主要有如下形式：
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橋接細(xì)胞：T細(xì)胞重新定向；
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抑制受體：靶向抑制癌基因受體酪氨酸激酶（RTKs），如EGFR和HER2，是一種成功的抗癌方法；
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靶向配體豐富區(qū)：針對(duì)多種生長(zhǎng)或血管生成因子的冗余或bsAbs感興趣的領(lǐng)域；
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靶向同一抗體的非重疊表位；
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協(xié)同因子或輔助因子模擬物。
政策：讀懂政策不迷路
FDA針對(duì)雙特異性抗體而出臺(tái)的指南并不多，只有2019年四月出臺(tái)的 Bispecific Antibody Development Programs, draft Guidance。
其他可以參考的內(nèi)容涉及雙特異性抗體的指南包括，美國(guó)FDA的Guidance for Industry – Bioanalytical Method Validation, ICH出臺(tái)的ICH Guideline – Bioanalytical Method Validation M10, 2019年FDA出臺(tái)的Immunogenicity Testing of Therapeutic Protein Products – Developing and Validating Assays for Anti-Drug Antibody Detections和2018年EMA出臺(tái)的Guideline on Immunogenicity assessment of therapeutic proteins。
國(guó)內(nèi)的法規(guī)和指南有涉及到雙特異性抗體的包括，9012生物樣品定量分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則，《治療性蛋白藥物臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見稿）》和《藥物免疫原性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見稿）》。
實(shí)踐：方法建立需要考慮的因素
生物藥物的分析方法是需要根據(jù)不同研究?jī)?nèi)容針對(duì)性的設(shè)計(jì)的，雙特異性抗體也不例外。根據(jù)分子不同的組成、性質(zhì)、作用機(jī)制以及需要監(jiān)測(cè)分析的內(nèi)容，我們?cè)趯?shí)踐中也應(yīng)該設(shè)計(jì)和選用獨(dú)有的特異的方法來得到可靠?jī)?yōu)質(zhì)的數(shù)據(jù)。在設(shè)計(jì)和選擇雙抗的分析方法時(shí)，我們需要從以下幾個(gè)角度去著重考慮：
在結(jié)構(gòu)上，根據(jù)合成的雙抗是否含有Fc段蛋白，可以分為IgG-like雙特異性抗體（含有Fc部分）和非IgG-like雙特異性抗體（不含F(xiàn)c部分）。IgG-like雙特異性抗體具有FC介導(dǎo)的效應(yīng)功能，分子量相對(duì)較大，有助于抗體后期的純化并提高其溶解性、穩(wěn)定性，對(duì)Assay的靈敏度要求不高，早期可基于IgG Fc抗體來建立方法；非IgG-like雙特異性抗體缺乏Fc段，僅通過抗原結(jié)合力發(fā)揮治療作用，具有較低的免疫原性、易于生產(chǎn)、分子量小等特點(diǎn)。因相對(duì)分子量較小，其在腫瘤組織的滲透性較高，因此具有更強(qiáng)的治療效果。在選擇生物分析方法時(shí)對(duì)Assay的靈敏度要求高，通常檢測(cè)抗體的方法基本不可用。
雙特異性抗體是一種具有多結(jié)構(gòu)域的抗體蛋白，有多個(gè)不同的結(jié)合位點(diǎn)，作用機(jī)制更為復(fù)雜，這些為雙抗藥物的分析方法的設(shè)計(jì)增加了更多的考慮點(diǎn)，帶來了更多的復(fù)雜性，需要測(cè)量的分子形式包括total, free, total bound，Partial bound，這些形式的分析需要Case by Case的考慮。
這種多結(jié)構(gòu)域的特征也使其免疫原性潛在考慮可能更為復(fù)雜，對(duì)一個(gè)域的免疫應(yīng)答可以抑制特定功能，但又同時(shí)保持其他域完整；潛在新表位的產(chǎn)生也可能引起顯著的免疫原性。因此，考察對(duì)雙特異性抗體的免疫應(yīng)答可能需要開發(fā)多種測(cè)定來測(cè)量對(duì)雙特異性抗體的不同結(jié)構(gòu)域的免疫應(yīng)答，免疫原性分析方法的考慮需要更為復(fù)雜和全面。
解決方案：尊龍凱時(shí)生物技術(shù)藥物分析部
尊龍凱時(shí)生物技術(shù)藥物分析室致力于為客戶量身打造case by case的生物分析方法，并利用先進(jìn)儀器和技術(shù)完成優(yōu)質(zhì)高效的試驗(yàn)服務(wù)。
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