上海尊龍凱時生物醫(yī)藥股份有限公司提供從動物模型到細胞功能檢測的全程技術(shù)服務(wù)，擁有專業(yè)的穩(wěn)定細胞株構(gòu)建人員，在細胞功能檢測領(lǐng)域可以進行細胞遷移、侵襲、凋亡、周期、增殖檢測、細胞藥物篩選等技術(shù)服務(wù)。穩(wěn)定表達細胞株指在細胞中持續(xù)穩(wěn)定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細胞染色體上，使細胞長期穩(wěn)定表達該基因或持續(xù)干擾目的基因。

穩(wěn)定細胞株服務(wù)項目
1、基因過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞細胞系構(gòu)建服務(wù)（基因過表達多克隆細胞株構(gòu)建服務(wù)、基因過表達單克隆細胞株構(gòu)建服務(wù)）：因過表達細胞株構(gòu)建服務(wù)包括目的基因過表達慢病毒載體構(gòu)建、病毒包裝、細胞轉(zhuǎn)染和篩選。您只需提供目的基因的cDNA質(zhì)粒和需要構(gòu)建的細胞系，我們將按照您的要求完成目的基因過表達細胞株的構(gòu)建和檢測，提供給您高質(zhì)量的基因過表達穩(wěn)定細胞株。
2、RNAi基因敲減穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株篩選服務(wù)（RNA干擾基因敲減細胞株多克隆構(gòu)建服務(wù)、RNA干擾基因敲減細胞株單克隆構(gòu)建服務(wù)）：英茂盛業(yè)的RNAi基因敲減細胞系構(gòu)建基于慢病毒表達系統(tǒng)，一般采用U6啟動子驅(qū)動的pLVshRNA-puro或pLVshRNA-EGFP(2A)puro載體構(gòu)建RNA干擾穩(wěn)定細胞株，服務(wù)內(nèi)容包括干擾載體構(gòu)建、靶點篩選、干擾效率驗證及穩(wěn)定細胞篩選和克隆。

3、CRISPR基因敲除穩(wěn)定細胞株構(gòu)建服務(wù)：隨著talen和Cas9/gRNA基因敲除系統(tǒng)的出現(xiàn)，基因定點敲除的難度大幅下降。全新的技術(shù)將基因敲除從價格高昂，耗時漫長的ZNF系統(tǒng)，逐漸變成簡便的研究工具。現(xiàn)在我們可提供Talen和Cas9/gRNA兩個系統(tǒng)的基因敲除服務(wù)。包括基因敲除靶點設(shè)計，talen質(zhì)粒組裝，Cas9/gRNA質(zhì)粒構(gòu)建及基因敲除效率驗證。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株服務(wù)流程
a、載體構(gòu)建：將外源基因構(gòu)建到合適的載體上。
b、細胞篩選濃度測定：以10-14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
c、細胞接種：轉(zhuǎn)染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據(jù)各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉(zhuǎn)染當天細胞應(yīng)達到60%-80%覆蓋。
d、細胞轉(zhuǎn)染：用構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)染目的細胞。
e、使用抗生素對細胞進行篩選。
f、篩選結(jié)果鑒定。

穩(wěn)定細胞株篩選方法

1、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，單克隆方法篩選穩(wěn)定細胞系：對大多數(shù)細胞轉(zhuǎn)染效率較低。對于基因過表達，如果轉(zhuǎn)染效率達到40%，基因過表達尚可。但是對于基因干擾實驗，對轉(zhuǎn)染效率要求遠遠高于基因過表達，通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法滿足。

另外，質(zhì)粒游離于細胞質(zhì)中，很快降解，無法滿足較長時間的檢測項目；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低，穩(wěn)定細胞株構(gòu)建耗時耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。
2、病毒感染篩選穩(wěn)定細胞株：病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩(wěn)定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，由于其高效整合、高效轉(zhuǎn)錄、高效表達、宿主范圍廣，感染效率高，且與細胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩(wěn)定細胞株的理想載體。

服務(wù)特點
1、穩(wěn)定：保證15代以內(nèi)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞穩(wěn)定表達。
2、迅速：一般控制在1個月以內(nèi)完成構(gòu)建。
3、經(jīng)濟：價格實惠，性價比高。
4、質(zhì)量保證：對外源基因進行嚴格鑒定。

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穩(wěn)定細胞株構(gòu)建篩選公司

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