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抗體的制備服務

根據制備的原理和方法，抗體制備服務可分為三類：多克隆抗體、單克隆抗體、基因工程抗體。

多克隆抗體制備 ：尊龍凱時多克隆抗體制備服務擁有專業的抗體制備人員、先進的抗體制備生產儀器、引進先進的制備技術，尊龍凱時根據客戶需求專業打造制備方案，主要提供的動物選擇包括兔、小鼠、大鼠等。

單克隆抗體制備 ：尊龍凱時單克隆抗體制備服務內容 （1）免疫和ELISA檢測：客戶提供蛋白質或多肽與載體蛋白（如KLH）偶聯，需要約4mg蛋白質免疫源或5~10mg多肽，免疫5只Balb/c小鼠，采血用ELISA進行檢測。  （2）融合和帥選：用小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞進行融合，得到的雜交瘤細胞通過增殖和ELISA篩選得到高效價的克隆。（3）亞克隆和交付結果：挑選兩個最好的克隆進行亞克隆和亞型鑒定，交付結果包括每個克隆一瓶細胞核5ml培養上清。

基因工程抗體制備 ：研究成功的基因工程抗體有：嵌合抗體、重構抗體、小分子抗體等。

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一、多克隆抗體制備服務

大多數天然抗原物質(如細菌或其分泌的外毒素以及各種組織成分等)往往具有多種不同的抗原決定簇，而每一決定簇都可刺激機體產生一種特異性抗體。
多克隆抗體是多個抗原決定簇刺激機體后，由多個免疫淋巴細胞分泌的多種抗體的混合物。

    多克隆抗體的制備方法

    由于這種抗體是不均一的，無論是對抗體分子結構與功能的研究或是臨床應用都受到很大限制，因此稱為第一代抗體；

二、單克隆抗體制備
在機體淋巴組織內可存在千百種抗體形成細胞(即B細胞)，每種抗體形成細胞只識別其相應的抗原決定簇，當受抗原刺激后可增殖分化為一種細胞群，這種由單一細胞增殖形成的細胞群體可稱為細胞克隆(clone)。
同一克隆的B細胞可合成和分泌在理化性質、分子結構、遺傳標記以及生物學特性等方面都是完全相同的均一性抗體，亦可稱之為單克隆抗體。單克隆抗體為只針對某一特定的抗原決定簇，純度高的抗體，因此稱為第二代抗體。

1、優點
（1）制備時不需純化抗原就可得到純抗體；　　　（2）有很高的效價
（3）有高度的單一性、均一性； 　　　　　　　  （4）產量高，且可連續生產

2、單克隆抗體制備基本原理
體內免疫法很難獲得單克隆抗體，如能將所需要的抗體形成細胞選出，并能在體外進行培養，就可以獲得已知特異的單克隆抗體。

雜交瘤細胞：既具有骨髓瘤細胞能大量無限生長繁殖的特性，又具有抗體形成細胞合成和分泌抗體的能力。這種抗體是由識別一種抗原決定簇的細胞克隆所產生的均一性抗體，故稱之為單克隆抗體。
應用雜交瘤技術可獲得幾乎所有抗原的單克隆抗體，只要這種抗原能引起小鼠的抗體應答。
（1）DNA合成
　① 主要途徑：參考生物化學，可被氨基喋呤(A)所阻斷
　② 旁路途徑：利用次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶核苷(T)合成DNA；
　　　　　　　 所需要的酶為次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(HGPRT)、胸腺嘧啶核苷激酶(TK)。
（2）骨髓瘤細胞：來源于BABC/ c小鼠的骨髓瘤細胞系；沒有合成抗體的能力；體外具有無限生長繁殖的能力；喪失合成HGPRT和TK的能力；只能通過主要途徑合成DNA；在含有次黃嘌呤(H)、氨基喋呤(A) 、胸腺嘧啶核苷(T)的HAT培養基中不能生長。
（3）免疫淋巴細胞：通常來源于BALB/c小鼠的脾淋巴細胞；具有合成抗體的能力；具有合成HGPRT和TK的能力；能通過主要途徑和旁路途徑合成DNA；HAT培養基中能生長，但短壽，只能存活幾天，體外不具有無限生長繁殖的能力
（4）融合劑：Kohler和Milstein最早仙臺病毒；后來發現聚乙二醇（PEG）的融合效果更好，且避免了病毒的污染問題。
（5）雜交瘤細胞：具有合成抗體的能力(從免疫淋巴細胞獲得)；具有合成HGPRT和TK的能力(從免疫淋巴細胞獲得)；能通過主要途徑和旁路途徑合成DNA；HAT培養基中能生長；體外具有無限生長繁殖的能力(從骨髓瘤細胞獲得)。
（6）飼養細胞：單個或少數細胞在體外培養很難成活，必需加入其他細胞以增加細胞密度，維持其代謝，使之成活繁殖；被加入的這種細胞稱為“飼養細胞”。最常用的小鼠腹腔巨噬細胞。

3、單克隆抗體制備過程：
制備抗原 → 免疫動物 → 免疫脾細胞和骨髓瘤細胞的制備 → 細胞融合 → 雜交瘤細胞的選擇培養 → 雜交瘤細胞的的篩選
→ 雜交瘤細胞的克隆化 → 單克隆抗體的檢定 → 雜交瘤細胞系的建立 → 單克隆抗體的大量制備（動物體內誘生法和體外培養法）

制備抗原免疫脾細胞和骨髓瘤細胞的制備細胞融合雜交瘤細胞的選擇培養雜交瘤細胞的的篩選雜交瘤細胞的克隆化單克隆抗體的檢定雜交瘤細胞系的建立單克隆抗體的大量制備

4、單克隆抗體的應用
（1）診斷試劑：用于各種病原體以及腫瘤的診斷。
（2）治療試劑：獸醫臨床上傳染病的治療；醫學臨床上抑制器官移植排斥、治療自身免疫疾病、制備生物導彈。
（3）檢測試劑：各種病原體毒力因子的檢測；各種免疫細胞及其它組織細胞表面分子的檢測。

三、基因工程抗體(genetically engineering antibody)
自1975年單克隆抗體雜交瘤技術問世以來，單克隆抗體在醫學中被廣泛地應用于疾病的診斷及治療。但目前絕大數單克隆抗體是鼠源的，臨床重復給藥時體內產生抗鼠抗體，使臨床療效減弱或消失。因此，醫學臨床上最理想的單克隆抗體應是人源的,但人-人雜交瘤技術目前尚未突破。
目前較好的解決辦法是能研制基因工程抗體，以代替鼠源單克隆抗體用于臨床。基因工程抗體興起于80年代早期，是利用DNA重組技術，在分子水平對抗體基因進行切割、拼接或修飾，或人工合成后導入受體細胞表達，從而產生的新型抗體，也稱為第三代抗體。

研究成功的基因工程抗體有：嵌合抗體、重構抗體、小分子抗體等。

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