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    常用蛋白表達系統——優缺點、應用領域

    2015-07-30
    |
    訪問量:

    蛋白表達是指用模式生物如細菌、酵母、動物細胞或者植物細胞表達外源基因蛋白的一種分子生物學技術。

    表達系統優點缺點應用領域
    大腸桿菌表達系統
    Escherichia coli
    表達水平高;
    低成本;
    簡單的培養條件;
    生產迅速;
    可拓展性強;
    轉化操作簡單;
    蛋白表達可以通過多個參數進行優化;
    容易形成二硫鍵
    蛋白折疊性較差(包括細菌蛋白);
    易形成包涵體;
    低效的體外折疊可能抵消優勢;
    與真核生物不同密碼子體系;
    很少的翻譯后修飾;
    內毒素
    純化蛋白的生產(結構、酶、藥物發現);
    藥物蛋白生產
    畢赤酵母表達系統
    Pichia pastoris
    表達水平高;
    低成本;
    簡單的培養條件;
    生產迅速;
    可拓展性強;
    分泌蛋白或細胞內表達的良好選擇;
    蛋白分泌高效且允許簡單純化;
    廣泛的翻譯后修飾;
    N-端糖基化能力優于釀酒酵母;
    無內毒素
    使用甲醇作為誘導劑具有一定危害;
    糖基化仍然不同于哺乳動物細胞
    純化蛋白的生產(結構、酶、藥物發現)
    釀酒酵母表達系統
    Saccharaomyces cerevisiae
    表達水平較高;
    分泌蛋白或細胞表達的良好選擇;
    低成本;
    簡單的培養條件;
    可拓展性強;
    擁有大多數真核生物的翻譯后修飾;
    有效的蛋白折疊;
    無內毒素;
    比畢赤酵母的表達水平低;
    分泌能力可能低于畢赤酵母;
    糖基化與哺乳動物細胞不同;
    過糖基化;
    N-端糖基鏈結構具有致敏性
    純化蛋白的生產(結構、酶、藥物發現);
    藥物蛋白生產
    哺乳動物細胞表達系統較高的表達水平;
    中度的可擴展性;
    細胞的懸浮培養特性可大規模生產;
    有效的蛋白折疊;
    適合分泌蛋白;
    充分的翻譯后修飾;
    無內毒素
    培養基昂貴;
    復雜的生長條件
    純化蛋白的生產(結構、酶、藥物發現);
    藥物蛋白生產;
    基于細胞的研究
    桿狀病毒浸染后的昆蟲細胞
    ( 桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統)
    表達水平高(特別是細胞內蛋白);
    較快的生長速度;
    有效的細胞折疊;
    中度可擴展性;
    廣泛的翻譯后修飾;
    糖基化與哺乳動物細胞類似;
    相對容易地酶促的去糖基化(對于蛋白結構測定有利);
    無內毒素
    培養基昂貴;
    需要大量的病毒;
    親肽的分泌通路低效;
    糖基化仍然不同于哺乳動物細胞;
    病毒侵染會導致細胞裂解和潛在的表達蛋白降解
    純化蛋白的生產(結構、酶、藥物發現)
    瞬時表達系統蛋白的快速生產通道轉染試劑昂貴;
    需要大量質粒DNA
    穩定細胞系可獲得蛋白生產細胞株系生產速度緩慢(需要數月),特別是使用選擇性克隆的情況下傳代過程中表達能力可能下降
    無細胞蛋白生產蛋白的快速生產通道;
    大腸桿菌,小麥胚芽,昆蟲和哺乳動物系統均市售;
    生產量的可控;
    蛋白合成條件可控;
    可容易地吸收非氨基酸組分;
    可利用PCR產物作為模版,適合于簡單的高通量方法;
    在沒有犬科胰島素的情況下有限的翻譯后修飾
    量化生產成本昂貴純化蛋白的生產(結構、酶、藥物發現);
    體外表達克隆;
    同位素標記過的核磁共振蛋白;
    吸收非天然氨基酸組分
    BacMam-介導的瞬時轉導蛋白的快速生產通道;
    可擴展性強;
    無需純化所需的大量質粒DNA;
    非裂解(參見桿狀病毒/昆蟲細胞)
    許多人體細胞的高效轉導;
    病毒需求量大


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