上海尊龍凱時的生物部在體外生物學(xué)領(lǐng)域有豐富廣泛的經(jīng)驗(yàn)，通過酶水平測定、細(xì)胞水平測定、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)、體外同位素測定、穩(wěn)定細(xì)胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技術(shù)等，提供一套完整的生物學(xué)服務(wù)。

尊龍凱時酶水平測定服務(wù)項(xiàng)目

多種技術(shù)平臺

分析試驗(yàn)
AlphaScreen分析試驗(yàn)
Z’-LYTE分析試驗(yàn)
Adapta? 通用激酶分析
Kinase-Glo? 激酶發(fā)光檢測分析
ADP-GloTM 激酶檢測分析
配體結(jié)合試驗(yàn)
酶聯(lián)免疫ELISA分析
HTRF 均相時間分辨熒光檢測分析

多樣性靶點(diǎn)和應(yīng)用

激酶
GPCR
蛋白酶
鉀-ATP酶
轉(zhuǎn)錄因子
細(xì)胞激素
代謝酶
生物標(biāo)記
蛋白結(jié)合
蛋白相互作用
化合物篩選

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酶活性又稱酶活力，是指酶催化制定化學(xué)反應(yīng)的能力。酶活力可以用一定條件下每次反應(yīng)的速度來表示。反應(yīng)速度愈快，就表明給定的酶溶液或組織提取液中的酶活力愈高。

酶活性的測定方法

根據(jù)酶促反應(yīng)時間的選擇不同，分為固定時間法和連續(xù)監(jiān)測法。
①固定時間法：測定酶促反應(yīng)開始后一段時間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的增加量。優(yōu)點(diǎn)：簡單缺點(diǎn)：難以確定反應(yīng)時間段酶促反應(yīng)是否處于線性期。
②連續(xù)檢測法：測定底物或產(chǎn)物隨時間的變化量，也稱為速率法。優(yōu)點(diǎn)：能動態(tài)觀測酶促反應(yīng)進(jìn)程，可以明顯找到反應(yīng)的線性期，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，標(biāo)本和試劑用量少，可在較短時間內(nèi)完成測定。缺點(diǎn)：對環(huán)境要求高，要求能夠精確地控制溫度、PH值和底物濃度等反應(yīng)條件，要求儀器具有恒溫裝置及自動檢測功能。

咨詢服務(wù)

酶活性測定的原理

酶活性測定的原理是通過直接測定反應(yīng)生成物的濃度變化，以單位時間內(nèi)反應(yīng)物的減少量或生成物的增加量來表示酶促反應(yīng)速率。

酶活性測定方法

常見的酶活性測定方法包括耦合反應(yīng)法、化學(xué)測定法、放射同位素法、測壓法、電極法和高效液相色譜法（HPLC）等。

影響酶活性測定的因素

①酶濃度
通常使底物過量，以確保酶可以充分與底物結(jié)合并發(fā)揮其催化功能。
②底物、輔因子的種類和濃度
1. 選擇合適的底物種類和濃度:
如果所測的酶專一性不強(qiáng)，可作用于多種底物，首先就需決定選擇哪一類底物作為測此酶的底物。確定底物種類后，重要的問題是選擇底物的合適濃度。
2. 輔因子、活化劑的種類和濃度:
從廣義上說，凡能促進(jìn)酶及反應(yīng)物進(jìn)入活化狀態(tài)從而加速酶催化反應(yīng)的物質(zhì)都能稱為輔因子，其種類繁多。
③反應(yīng)體系的最適pH、緩沖液的種類和濃度
在酶反應(yīng)的其它條件不變的情況下，在不同pH下可得各種類型的酶活性與pH關(guān)系，將酶活性最高處的pH稱為最適pH 。
緩沖液含有大量離子，或影響酶蛋白的構(gòu)型，或影響底物的解離程度等等，從而影響酶活性。
④溫度的控制
測定酶時都需要酶和底物在一定溫度下作用一段時間，在此期間，溫度有可能使酶失活，不同酶在此方面差異很大，目前常規(guī)工作實(shí)驗(yàn)室越來越多的使用37℃，溫度升高，反應(yīng)速度快，靈敏度高。
不論選用何種溫度測酶，由于酶反應(yīng)受溫度影響很大，在測定時間內(nèi)，反應(yīng)體系的溫度變化應(yīng)控制在±0.1℃內(nèi)。應(yīng)用國產(chǎn)普通恒溫水浴箱來測酶活性是不合適的，應(yīng)使用帶有攪拌器的高級恒溫水浴。
⑤其它影響酶活性因素
在其他影響因素中，對酶活性測定影響最大的是抑制劑的作用。

酶活性檢測實(shí)驗(yàn)設(shè)計和注意事項(xiàng)

平行試驗(yàn)：在酶活性測定中，為了消除系統(tǒng)和操作誤差，每次測定均需設(shè)置正常和異常對照，待測樣品應(yīng)設(shè)置雙份，取其結(jié)果的平均值，并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的正常值和對照管的結(jié)果進(jìn)行綜合分析。通常選用易失活的酶作為參考酶進(jìn)行同步測定，只有當(dāng)參考酶活性正常時，才能確認(rèn)所得結(jié)果可靠，從而排除假陽性。
防止酶失活：這是實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性和成功的關(guān)鍵。在細(xì)胞分離、超聲破碎、離心等操作過程中，應(yīng)全程保持在4°C條件下進(jìn)行，標(biāo)本采集后需立即處理。

酶活性測定反應(yīng)終止方法

①通過改變pH值使蛋白質(zhì)變性沉淀
②急熱100度
③使用1% SDS中止反應(yīng)，注意protease K等在SDS下仍有活性。
④對于金屬離子參與的反應(yīng)，可加入EDTA終止
⑤加入抑制劑
⑥在放射性測定中，可加入大量非放射性底物以終止反應(yīng)。

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以上是關(guān)于酶活性測定、酶活性檢測等內(nèi)容，如有其他疑問，歡迎聯(lián)系我們

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尊龍凱時酶活性測定服務(wù)