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GPCR（G蛋白偶聯(lián)受體）作為細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的核心分子，在藥物研發(fā)和基礎(chǔ)研究中具有極為重要的地位。作為人體中最大的膜受體超家族，GPCR參與了絕大多數(shù)生理過(guò)程和病理機(jī)制，并廣泛分布于各個(gè)組織器官。GPCR活性檢測(cè)技術(shù)是研究GPCR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、功能機(jī)制以及藥物篩選的關(guān)鍵手段。

這些技術(shù)通過(guò)檢測(cè)GPCR激活后引發(fā)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)變化，幫助科研人員深入了解受體的活性狀態(tài)、信號(hào)傳導(dǎo)路徑以及與配體的相互作用。尊龍凱時(shí)云講堂邀請(qǐng)侯利蘋(píng)博士為大家解答GPCR細(xì)胞活性檢測(cè)技術(shù)遇到的問(wèn)題。

如果你也有關(guān)于GPCR的問(wèn)題，可以觀(guān)看侯利蘋(píng)博士云講堂視頻回放！

1、cAMP是很小的分子，并且在體內(nèi)是天然存在的，怎么獲得cAMP的抗體的？   

侯利蘋(píng)博士：小分子通常被定義為半抗原，本身難以刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，也不容易誘導(dǎo)抗體生成。為了獲得針對(duì)小分子的抗體，一般是將小分子（如cAMP）與大分子載體（如BSA）結(jié)合，使其能夠被免疫系統(tǒng)識(shí)別，然后免疫動(dòng)物并利用雜交瘤技術(shù)獲得單克隆抗體。

2、尊龍凱時(shí)是否對(duì)外承接GPCR細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)。一般需要多久？

侯利蘋(píng)博士：我們可以承接GPCR細(xì)胞株構(gòu)建業(yè)務(wù)，在構(gòu)建細(xì)胞株的過(guò)程中，首先需要進(jìn)行慢病毒質(zhì)粒合成，這個(gè)一般需要2到3周，完成質(zhì)粒合成后，我們進(jìn)入病毒包裝階段，這一過(guò)程大約需要1周。接下來(lái)構(gòu)建混合克隆，我們需要進(jìn)行抗生素篩選和擴(kuò)增，這一階段大約需要2周，獲得混合克隆是6周。如果后續(xù)檢測(cè)需要單克隆細(xì)胞，我們將使用流式細(xì)胞儀將細(xì)胞分選至96孔板中進(jìn)行培養(yǎng)。單克隆細(xì)胞的生長(zhǎng)和擴(kuò)增過(guò)程大約需要1個(gè)月，之后的擴(kuò)增和檢測(cè)需要2周。

因此，整個(gè)時(shí)間周期為：質(zhì)粒合成一般2-3周，病毒包裝1周，混合克隆篩選2周，單克隆篩選6周，即拿到混合克隆6周，拿到單克隆12周。

3、鈣流檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞密度為什么選擇5,000細(xì)胞/孔？

侯利蘋(píng)博士：5,000細(xì)胞/孔是我們常用的密度。由于鈣流檢測(cè)需要讀取光信號(hào)，細(xì)胞需要均勻鋪滿(mǎn)孔底，避免密度過(guò)高導(dǎo)致信號(hào)干擾。當(dāng)然，根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型和實(shí)驗(yàn)需求，這一密度也可以根據(jù)細(xì)胞密度適當(dāng)調(diào)整。

如果您對(duì)于新藥研發(fā)臨床前研究過(guò)程中有一些困惑或者想要深入了解的專(zhuān)題內(nèi)容，可以留下您的問(wèn)題和建議，尊龍凱時(shí)希望和您一起，探索新藥研發(fā)的奇妙世界。