尊龍凱時轉化醫(yī)學平臺擁有經(jīng)驗豐富的專業(yè)化技術團隊，從藥物靶點的作用機制和生物標志物的臨床應用出發(fā)，以生物標志物的發(fā)現(xiàn)和驗證為基礎，結合多種不同的技術平臺和先進的儀器，創(chuàng)建了多種生物分析方法，降低了藥物研發(fā)的成本和時間，為不同類型的藥物、不同類型的藥企和不同研發(fā)階段的項目提供多元高效的服務。

轉化醫(yī)學以藥物研發(fā)過程中生物標志物為核心，以精準醫(yī)療提高藥物研發(fā)臨床應答率為目標，覆蓋從早期靶點確認——臨床前R&D ——臨床I、II、III期Development，到上市后的藥物檢測，通過不同階段的研究實現(xiàn)藥物研發(fā)的閉環(huán)。
- 01
  藥物發(fā)現(xiàn)
- 02
  CMC研究
- 03
  臨床前研究
- 04
  臨床研究
- 05
  上市
隨著基因組學、蛋白質組學和代謝組學等多組學分析技術不斷地發(fā)展，治療方式已經(jīng)從傳統(tǒng)小分子擴展到多肽、蛋白、抗體、基因療法、細胞療法等多種新型技術。盡管有這些新技術，但仍有大量疾病的致病原因還無法徹底明白。
轉化醫(yī)學將生物醫(yī)學觀察和研究轉化為改善健康的干預措施的過程，加速了基礎研究、新藥開發(fā)的和臨床轉化的進程，成為精準靶向治療的加速器。轉化醫(yī)學研究利用各種研究手段，確定靶點與疾病發(fā)生發(fā)展的關系、驗證和探索藥物的作用機制、發(fā)現(xiàn)生物標志物并開發(fā)伴隨診斷產(chǎn)品，以及為臨床研究開展篩選最合適的人群和適應癥等，從而提高新藥研發(fā)效率和成功率。
將轉化醫(yī)學里程碑疊加到藥物開發(fā)階段^[1]
尊龍凱時請回答：什么是轉化醫(yī)學

服務平臺

細胞因子和生物標志物檢測

尊龍凱時可以為廣大醫(yī)藥研發(fā)人員提供細胞因子及生物標志物的檢測服務，其生物分析部基礎設施齊全、儀器設備先進，擁有的流式CBA、MSD、Luminex系統(tǒng)等高端技術平臺可以進行各種single plex或multiplex多形式的細胞因子和生物標志物的檢測。

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生物分析技術服務平臺

尊龍凱時生物分析部可以為客戶提供小分子藥物、大分子生物制品、生物標志物的篩選與開發(fā)，以及臨床前和臨床階段的研究服務。可以提供符合FDA/NMPA GLP的生物技術藥物生物分析服務，以支持蛋白藥物、抗體藥物、疫苗、生物標志物、細胞和基因治療藥物的早期開發(fā)，及其臨床前研究和臨床研究。

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流式細胞技術平臺

截至目前，尊龍凱時承接的流式檢測項目已經(jīng)近400項，包括細胞表面抗原表達的流式檢測；細胞增殖、細胞分化、細胞凋亡等的流式分析；動物外周血及各免疫器官檢測；移植瘤模型流式檢測等。

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免疫組化技術平臺

免疫組化簡介
免疫組化，也稱免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry)。是指應用免疫學基本原理即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及相對定量的研究。根據(jù)抗原抗體反應和化學顯色的原理，組織切片或細胞樣本中的抗原先和一抗結合，再利用一抗與二抗反應，DAB進行顯色，進而進行分析。
主要步驟
組織處理、固定、切片抗原修復除去內源性過氧化物酶封閉一抗、二抗孵育檢測復染

組織處理、固定、切片

組織固定可保存抗原，防止采集的組織自溶和壞死。組織包埋可在切片過程中對組織提供支撐，使切片更堅實。

	石蠟切片	冰凍切片
固定	包埋前：甲醛	切片前或切片后：甲醛、甲醇、乙醇或丙酮
切片	切片機	冰凍切片機
儲存	室溫下儲存多年	-80 °C下儲存1年（-190°C下儲存時間更長）
優(yōu)勢	容易操作，不會損壞切片	? 保留酶的功能和抗原性 ? 實驗流程簡短（通常不需要冗長的固定步驟）
局限性	? 過度固定會掩蓋抗原表位，進而增加抗原修復的需求 ? 處理時間長：在梯度酒精和二甲苯中逐步脫水，以便于石蠟滲透。	? 如果沒有快速冷凍組織”可能會形成冰晶，從而破壞組織結構 ? 冰凍切片通常比石蠟切片厚，可能會導致分辨率低、圖像差 ? 可能需要阻斷內源活性酶。

石蠟切片 vs冰凍切片

處理流程

抗原修復

對甲醛固定的組織切片進行抗原修復，以暴露抗原位點，從而使抗體結合。

	熱誘導的抗原表位修復	蛋白水解酶誘導的抗原表位修復
優(yōu)勢	抗原表位的修復更溫和，參數(shù)更可控。	適用于較難修復的抗原表位。
ph值	通常使用pH6的緩沖液，但堿性緩沖液也在廣泛使用。必須通過實驗確定	pH值通常為7.4。
溫度	約95°C。	通常為37°C
孵育時間	10-20分鐘	10-15分鐘
緩沖液組分	取決于靶抗原所需的pH 值。常用的緩沖液包括檸檬酸鈉、EDTA和Tris-EDTA	酶(如胃蛋白酶、蛋白酶K 或胰蛋白酶)的中性緩沖液。
注意事項	微波爐加熱可能會導致抗原修復不均勻。劇烈沸騰會導致脫片(組織與載玻片分離）。	酶修復有時會破壞切片的形態(tài)- 濃度和時間需要優(yōu)化

抗原修復的主要方法

封閉
用血清或BSA封閉，防止抗體的非特異性結合，并降低背景和潛在的假陽性結果。
? 蛋白封閉：使用血清或BSA 進行封閉對于防止抗體與組織或Fc 受體（與抗體恒定區(qū)（Fc）結合的受體）發(fā)生非特異性結合至關重要。二抗種屬來源的血清是很好的封閉試劑。使用牛血清白蛋白（BSA）或酪蛋白，可用于阻斷非特異性抗體結合。
? 生物素封閉：在使用基于親和素/生物素的檢測系統(tǒng)時，阻斷內源性生物素，因為內源性生物素存在于許多組織中，特別是腎臟、脾臟、肝臟和大腦中。用親和素與組織孵育，阻斷內源生物素，然后用外源生物素孵育，以阻斷親和素分子上額外的生物素結合位點。
檢測
? 酶顯色法：顯色檢測使用酶能夠催化可溶性底物產(chǎn)生有色沉淀。這些酶通常偶聯(lián)在二抗上，也可以偶聯(lián)在一抗上用于直接檢測。最常用的酶有HRP 和AP，前者將DAB 轉化成棕色產(chǎn)物，后者將3-氨基-9-乙基咔唑 (AEC) 轉化成紅色產(chǎn)物。顯色檢測通常比熒光檢測更靈敏。此外，不同于熒光染料，有色沉淀物有光穩(wěn)定性，因此染色切片能夠保存多年。熒光檢測需要使用專業(yè)熒光顯微鏡和濾光片，顯色檢測僅需使用標準顯微鏡。然而，顯色檢測的孵育和封閉步驟比熒光法更多，時間也更長。
? 熒光法：熒光檢測（免疫熒光）是基于熒光基團被特定波長的光激發(fā)后發(fā)射波長較長的熒光的特性。熒光檢測常常用于需要同時檢測多種抗原的情況。熒光染料可以與一抗或二抗直接偶聯(lián)，也可與鏈霉素親和素偶聯(lián)。
案例賞析：PD-L1, Ki-67, Her2, CD31, CD163, FoxP3
IHC Analysis of the expression of
a)PD-L1 from lung adenocarcinoma^[3]; b)Ki-67 from periampullary tumors^[4]; c)Her2 from lung tumor^[5]; d)CD31 from human gastric adenocarcinoma^[6]; e)CD163 (M2 TAM marker) from oral squamous cell carcinoma (OSCC)^[7]; f)FoxP3 from human glioblastoma^[8].

總結與展望

基于基因組學、蛋白組學、細胞組學及病理組學等綜合性轉化醫(yī)學平臺；高質量的研發(fā)管理團隊；尊龍凱時轉化醫(yī)學平臺致力于為全球合作伙伴提供全方位生物標志物發(fā)現(xiàn)、靶點驗證、伴隨診斷開發(fā)與商業(yè)化檢測等一體化解決方案。
? 以ELISA、ECL（MSD), SIMOA（HD-X), Biacore 8K 技術構建的的蛋白質相互作用，蛋白水平生物標志物平臺；
? 以流式細胞術（BD Symphony A3，BD Fortesssa, Beckman CytoFLEX S）為主構建的細胞水平生物標志物平臺；
? 以熒光定量PCR技術構建的多重核酸水平生物標志物平臺；
? 免疫組化（TAMs-IHC，F(xiàn)ISH）技術構建的病理水平生物標志物平臺等。

參考文獻：
[1] Hugues Dolgos, et al. Translational Medicine Guide transforms drug development processes: the recent Merck experience. Drug Discov Today. 2016 Mar;21(3):517-26. doi: 10.1016/j.drudis.2016.01.003.
[2] Ying Xu, et al. A Selective Small-Molecule c-Myc Degrader Potently Regresses Lethal c-Myc Overexpressing Tumors. Adv Sci (Weinh). 2022 Mar;9(8):e2104344. doi: 10.1002/advs.202104344.
[3] Jonas J Heymann, et al. PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens. Cancer Cytopathol. 2017 Dec;125(12):896-907. doi: 10.1002/cncy.21937.
[4] Mark M Aloysius, et al. Predictive value of tumor proliferative indices in periampullary cancers: Ki-67, mitotic activity index (MI) and volume corrected mitotic index (M/V) using tissue microarrays. World J Surg. 2010 Sep;34(9):2115-21. doi: 10.1007/s00268-010-0681-3.
[5] Montse Verdu, et al. Cross-reactivity of EGFR mutation-specific immunohistochemistry assay in HER2-positive tumors. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 2015 Sep;23(8):565-70.
[6] Qingling Wang, et al. EPCR promotes MGC803 human gastric cancer cell tumor angiogenesis in vitro through activating ERK1/2 and AKT in a PAR1-dependent manner. Oncol Lett. 2018 Aug;16(2):1565-1570. doi: 10.3892/ol.2018.8869.
[7] Faustino J Suárez-Sánchez, et al. Macrophages in Oral Carcinomas: Relationship with Cancer Stem Cell Markers and PD-L1 Expression. Cancers (Basel) (IF: 6.13; Q1). 2020 Jul 2;12(7):1764. doi: 10.3390/cancers12071764.
[8] Qi Yue, et al. The prognostic value of Foxp3+ tumor-infiltrating lymphocytes in patients with glioblastoma. J Neurooncol. 2014 Jan;116(2):251-9. doi: 10.1007/s11060-013-1314-0. Epub 2013 Nov 26.[9] Christopher P Austin.Opportunities and challenges in translational science. Clin Transl Sci. 2021 Sep;14(5):1629-1647. doi: 10.1111/cts.13055.

FAQs

什么是流式細胞術

流式細胞術（Flow Cytometry，簡稱FCM）是一種高效、精準且客觀的技術，能夠同時檢測單個細胞在快速直線流動狀態(tài)下的多項物理和生物學特征，并進行定量分析與分選。
流式細胞儀（Flow Cytometer）則是一種集激光技術、電子物理技術、光電測量技術、計算機技術、細胞熒光化學技術以及單克隆抗體技術于一體的新型高科技儀器，廣泛應用于細胞分析和分選等領域。
流式細胞儀的優(yōu)勢有哪些

? 檢測速度快,分析樣本量大
流式細胞儀在極短時間內可分析大量細胞,這是其區(qū)別于其他細胞分析儀器的主要特點,測量速率可高達每秒上萬個細胞。
? 可同時分析單個細胞的多種特征
通過使用不同熒光素標記的單克隆抗體或者熒光染料對細胞進行熒光染色,流式細胞儀可以獲取單細胞的多種信息。
? 檢測樣本種類多樣
流式細胞儀能夠檢測多種樣本，包括外周血、骨髓、細針穿刺樣本、灌洗液、實體組織，以及懸浮或貼壁培養(yǎng)的細胞。此外，還可用于分析微生物和人工合成微球等樣本。