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核磁共振是基于特定原子核（主要為I=1/2的1H、13C、15N、19F、31P等）在外磁場（1~21 Tesla，1 tesla=104guass）中吸收了與其分裂能級間能量差相對應的射頻場能量而產生共振的原理。核磁共振兼具定性分析及定量檢測兩種優勢，廣泛應用于化學、食品、藥品等領域。
定量核磁技術（Quantitative Nuclear Magnetic，簡稱QNMR)主要是基于1H-NMR，待測化合物1H-NMR譜上各信號峰強度之比等于相應的質子數之比，確定氫的積分值與其摩爾濃度成正比，定量核磁方法分為相對定量法和絕對定量法。相對定量法是QNMR中最簡單的，通過比較2種或2種以上成分特征峰的峰面積來確定含量；絕對定量法是以結構和含量已知的化合物為參照，與待測物制成溶液進行測定，通過比較兩者的信號積分強度來確定待測物的含量，絕對定量法根據實驗方法不同又分為內標法、外標法和標準加入法。
定量核磁技術在藥學領域的應用有以下方面：
▲反應過程監測
▲對照品賦值
▲原料藥含量測定
▲藥物制劑的含量測定
▲藥物的雜質檢查
▲化合物純度檢查
▲多組分純度確定
▲代謝組學研究
▲聚合物組成研究等。
2010版中國藥典二部附錄中首次提到核磁共振波譜法，2020版改為四部通則0441核磁共振波譜法。USP現行版、EP 10.8版、JP第18版和中國藥典2020年版的NMR法通則內容對比如下表所示。中國藥典2020年版0441通則包括原理、NMR儀、核磁共振譜、測定方法四部分。定量分析中提供了絕對定量模式和相對定量模式的供試品溶液制備方法、測定方法和計算公式，并簡要例舉了需要注意的實驗參數的設置及優化項目。
▲ 待測物及內標物在所選氣代試劑中完全溶解;
▲ 關注待測物性質，不與氣代試劑發生反應;
▲ 必要時可加入重水或TFA移除水峰干擾。
▲ 內標物的選擇由待測物出峰情況確定;
▲ 內標物定量峰與待測物出峰不重疊;
▲ 關注內標物化學性質，不與待測物反應
▲ 內標物樣品性質穩定，定量峰峰型簡單
▲ 定量峰與其他信號峰基線分離;
▲ 定量峰之間靠近，峰型接近，避免基線帶來的干擾;
▲ 不選活潑區信號峰作為定量峰;
▲ 盡量避免衛星峰的干擾。
▲ 為減少稱量誤差使用精密度高的分析天平稱量，同時稱量量在10mg以上;
▲ 如果樣品活潑氫較多，可以滴加重水、氘代甲醇等試劑去除活潑氫;
▲ 樣品完全溶解是必要的。
▲ 掃描次數:保證定量峰的信噪比足夠;
▲ 弛豫延遲:保證重復掃描時信號能夠完全弛豫，一般為5倍以上的T1;三角形;
▲ 脈沖激發:O1P應在待測物和內標物信號頻率之間，減少偏共振效應
▲ 手動積分一般較自動積分準確;
▲ 避免衛星峰以及基線下雜峰的干擾;
▲ 必要時對基線、峰相位進行矯正，使峰型對稱，減少積分誤差;
▲ 內標物和待測物的定量峰積分應較為接近。
▲ 待測物和內標物定量峰響應差距過大;
▲ 稱量誤差，最好保證樣品稱量值大于天平最小稱量值的兩倍以上;
▲ 儀器參數的影響，如共振偏移、AQ設置不當RG值設置過小等造成的影響。
▲ 開具相關驗收報告;
▲ 如有需要樣品可以回收處理。
尊龍凱時核磁分析平臺擁有強大成熟的分析設備、完整合規的樣品檢測分析流程、從目標化合物的制備到鑒定（結構確認）再到定量賦值（雜質COA）的一條龍服務。研究結果滿足藥物注冊申報研究要求，同時積極配合客戶完成審計及藥監部門的現場核查工作。
上海尊龍凱時生物醫藥股份有限公司研究團隊累積了豐富的藥物定量核磁研究，接下來隨小編從以下兩個案例，與大家共同探討藥物定量核磁方法學的研究。
項目背景
▲ API中的光照降解未知雜質結構鑒定及賦值；
▲ 目標雜質API中僅少量存在，需要進行干預破壞；
▲ 目標雜質制備后容易降解，考察其保存穩定條件；
▲ 制備出穩定狀態雜質后進行結構鑒定及QNMR進行賦值；
▲ 交付結構鑒定報告及目標雜質標化COA。
目標雜質核磁圖譜數據
目標雜質LCMSMS圖譜
項目背景
▲ 要求完成樣品定量核磁方法開發及其驗證；
▲ 進行專屬性、系統適用性、準確度、線性、穩定性、精密度等驗證；
▲ 交付中英文版驗證方案、報告、完成樣品檢測。
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