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在藥物新藥研發(fā)中，離子色譜技術(shù)被廣泛運(yùn)用于藥物成分分析、含量檢測(cè)、雜質(zhì)控制等方面。離子色譜技術(shù)在藥物研發(fā)中彌補(bǔ)的了常規(guī)色譜技術(shù)的不足，為藥物質(zhì)量控制和藥物安全性評(píng)價(jià)提供了可靠的技術(shù)支持。通過離子色譜技術(shù)，藥物研發(fā)人員能夠更好地了解藥物的成分和性質(zhì)，有助于優(yōu)化藥物配方、改進(jìn)生產(chǎn)工藝，從而提高藥物的療效和安全性。
近期，尊龍凱時(shí)云講堂CMC專題直播中，關(guān)于離子色譜的解讀，收到了大家的熱烈反饋和提問，本文為大家整理了直播中的高頻問題和尊龍凱時(shí)工藝分析部高級(jí)組長(zhǎng)徐健的回答，希望能夠幫助減少研發(fā)中的苦惱和困惑。

歡迎點(diǎn)擊：觀看離子色譜的抑制技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用直播回顧徐健老師的整場(chǎng)分享。關(guān)于新藥研發(fā)的質(zhì)量學(xué)研究方面，您還有什么困惑和感興趣的話題嗎？歡迎在文章最后留言。

問：陰離子模式，陽(yáng)離子模式，常見的淋洗液都有什么？它們的區(qū)別又分別是什么？

答：陰陽(yáng)離子檢測(cè)通常選用離子交換柱，當(dāng)洗脫陰離子，我們主要使用氫氧化鉀、氫氧化鈉、碳酸鈉和碳酸氫鈉等淋洗液。在陽(yáng)離子體系中，例如，鈉離子和甲離子需要使用酸性淋洗液，比較常用的有甲基磺酸和硝酸，這兩種酸是常見的用于陽(yáng)離子淋洗液。因此，在選擇淋洗液時(shí)，需要根據(jù)具體情況選擇堿性或酸性的淋洗液。對(duì)于酸根檢測(cè)，需要使用堿性淋洗液；而對(duì)于陽(yáng)離子檢測(cè)，則使用酸性淋洗液。
此外，對(duì)于淋洗液的要求也很重要，需要選擇較高級(jí)別的淋洗液以確保準(zhǔn)確性。在手動(dòng)配置陽(yáng)離子淋洗液時(shí)，需要注意使用質(zhì)譜級(jí)或者優(yōu)級(jí)純的硝酸或者甲磺酸配制淋洗液，不然可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)背景污染高的問題。

問：離子價(jià)態(tài)不同保留和溫度的關(guān)系是因?yàn)榉磻?yīng)速率影響嗎？鹵素離子的保留和離子半徑有關(guān)嗎？

答：是的，反應(yīng)速率可能會(huì)受到溫度的影響，從而影響離子的保留。關(guān)于鹵素離子半徑的部分，因?yàn)槠邢薏⑽丛谖业腜PT中展示。直播中我列舉了一些經(jīng)典案例，探討離子保留的影響因素。離子半徑越大，則其保留效果越顯著。通過下圖案例，以氟離子、氯離子、溴離子和碘離子為例。這些離子均帶有相同電荷數(shù)，但其離子半徑逐漸增大。觀察圖表可發(fā)現(xiàn)，離子半徑越大，在相同色譜條件下，其保留效果越強(qiáng)。

問：樣品X-不會(huì)透過陽(yáng)離子膜跟H+結(jié)合嗎？

答：在陽(yáng)離子交換膜中，僅允許正電荷離子通過。這些負(fù)離子無法穿過陽(yáng)離子半透膜，因此不會(huì)透過半透膜與氫離子結(jié)合，只有帶正電荷的氫離子通過陽(yáng)離子交換膜再與X-，如氯離子、溴離子或硝酸根離子結(jié)合形成相應(yīng)的酸。

問：手性能分離嗎？

答：手性分離的效果并不理想。盡管我們考慮過嘗試某些具有手性結(jié)構(gòu)的化合物通過離子色譜進(jìn)行分離，但分離效果較差。因此會(huì)選擇其他的方式檢測(cè)，比如CAD檢測(cè)器，可采用反相模式下的手性分離或CAD為檢測(cè)器的正相分離模式。

問：有沒有遇到離子色譜檢測(cè)樣品過程中，分子量大成分洗脫不下來，導(dǎo)致色譜柱性能下降，如聚乙二醇，如何解決？

答：在實(shí)驗(yàn)中，您可以使用色譜再生功能，我們的體系是允許有機(jī)相存在的。如果您采用淋洗液發(fā)生器模式，可以將其斷連并短接到色譜柱泵出口，然后直接連接至檢測(cè)器，避免連接抑制器和淋洗液發(fā)生器。然后可以使用有機(jī)溶劑進(jìn)行沖洗，比如使用50%乙腈水溶液再生。由于內(nèi)部可能存在聚乙二醇導(dǎo)致無法洗脫，所以使用有機(jī)相清洗色譜柱。需要注意的是，清洗后，務(wù)必將色譜柱保存在淋洗液體系中，例如使用AS色譜柱、A系列色譜柱、陰離子色譜柱時(shí)，保存至少5毫摩爾氫氧化鈉、氫氧化鉀體系中，避免保存在水或其他有機(jī)相體系中。除此之外，柱效下降也可能是因?yàn)榛衔锏臍埩?，如果有無法洗脫的問題出現(xiàn)，可以在序列做完后，通過有機(jī)項(xiàng)，例如50%或者30%乙腈進(jìn)行洗脫。

問：這里的流動(dòng)相怎么選？

答：在常規(guī)實(shí)驗(yàn)中，公布的文獻(xiàn)和方法中經(jīng)常使用陰離子淋洗液，最常見的氫氧化鉀或氫氧化鈉。這兩類淋洗液可以解決至少90%的陰離子檢測(cè)。對(duì)于陽(yáng)離子部分，常用的是甲基磺酸，是目前陽(yáng)離子檢測(cè)中最常見的淋洗液。當(dāng)測(cè)試鉀鈉離子、鈣鎂離子以及銨根離子時(shí)，甲基磺酸是最常用的淋洗液液之一。

問：不溶解的樣品如何進(jìn)樣的？

答：對(duì)于不容易溶解的樣品，需要選擇一個(gè)適合的稀釋劑來溶解樣品。比如可以選擇有機(jī)試劑，如二甲亞砜（DMSO）、甲醇或乙腈等。先通過有機(jī)試劑溶解樣品，在加入水或淋洗液稀釋，通常的常規(guī)離子在第一次溶解后，不會(huì)再被化合物包裹或吸附，通常可以被檢測(cè)到，從而不會(huì)影響回收率和檢出量的準(zhǔn)確性。主要注意，一般有機(jī)試劑的添加量不應(yīng)超過5%，超過5%雖然可以，但是有機(jī)試劑添加量比較多，當(dāng)樣品進(jìn)樣后在純水相體系中，樣品可能會(huì)瞬間析出，出現(xiàn)堵塞進(jìn)樣針，六通閥、色譜柱甚至檢測(cè)器的風(fēng)險(xiǎn)。所以最好不要超過5%，我們通常會(huì)使用1%或2%有機(jī)相。如果有用的多的情況下需要多多觀察，查看有機(jī)試劑加入后會(huì)不會(huì)有大量的析出。

問：可以用多大比例有幾相沖？會(huì)損害色譜柱？

答：根據(jù)文獻(xiàn)，使用50%乙腈沖洗通常是可以的，但要注意不要保留在乙腈中，沖洗后應(yīng)該用水相過渡，然后用淋洗液保存。例如，如果使用的是AS系列的柱子，假設(shè)測(cè)量完成后需要沖洗色譜柱，可以使用50%或30%的乙腈進(jìn)行一定時(shí)間的沖洗。一般是20倍柱體積就可以認(rèn)為沖洗干凈。接著，可以用純水進(jìn)行過渡，之后再過渡到淋洗液中，比如氫氧化鉀或氫氧化鈉。

問：陽(yáng)離子抑制器的壽命比較短，使用過程如何注意？

答：抑制器最怕干燒和樣品的吸附，主要是抑制器中的半透膜比較脆弱，壓力高、干燒和樣品吸附較多的情況下半透膜會(huì)出現(xiàn)不可逆的損毀，建議采用外接循環(huán)水模式，不要使用檢測(cè)器廢液作為抑制器水；抑制器長(zhǎng)期不用的情況下，每周沖洗一次。

問：抑制器短期及長(zhǎng)期保存用什么溶液？

答：短期的可以保存在淋洗液和超純水中，注意區(qū)分好流路，每周沖洗一次；不建議長(zhǎng)期保存，抑制器內(nèi)如果干涸可能會(huì)造成損壞，如果已存在長(zhǎng)期保存并沒有做每周維護(hù)的這種，可以使用廠家的抑制器再生方法，使用前對(duì)抑制器再生，不要直接連接到儀器上使用。